一、線性的定義

　　紫外可見分光光度計的線性是指實驗點接近或偏離比耳定律A = f ( C) 直線部分的程度。換言之, 如果給定化合物的兩個濃度的響應(yīng)值之差正比于兩個被測試樣的濃度差, 且該差值在誤差要求的范圍內(nèi), 則可認(rèn)為紫外可見分光光度計的輸出是線性的。

　二、線性對分析測試誤差的影響

　　紫外可見分光光度計的線性在定量分析工作中有著極其重要的意義。Joh nson、Scot t、Mun k 等人曾多次指出, 如果儀器的線性很差, 就不可能得到好的定量分析結(jié)果。作者在實踐中發(fā)現(xiàn), 在給定儀器的情況下( 即儀器的噪聲為“ + ” 值時) , 當(dāng)被測試樣的濃度小到一定程度時, 實驗結(jié)果偏離比耳定律的直線而明顯地向上彎曲, 反之則向下。作者用自制的UV/ FL-1 型紫外/ 熒光分光光度計測試濃度為4. 06×10 - 6 g/ ml 的K2 CrO4 時, 因儀器“ + ”噪聲的影響, 產(chǎn)生的吸光度相對誤差( 正偏差) 達25% , 即真值為0. 0052A實測為0. 0056A。而當(dāng)濃度增大到2. 01×10 - 3 g/ ml 時, 因雜散光的影響, 實測K2 CrO4 的吸光度誤差達到36% ( 負(fù)偏差) 。因此, 在定量分析時, 必須嚴(yán)格注意儀器的線性, 否則不能得到好的分析結(jié)果。

　　三、儀器線性的測試方法

　　在正式使用一臺新的儀器以前, 一般都先對儀器的線性進行測試。但大多數(shù)使用者只是在某一試樣的某一濃度附近, 用濃度的倍數(shù)變化, 測出這一段的線性。這只能反映儀器在小范圍內(nèi)的實用情況, 并不能說明儀器的線性是否符合出廠指標(biāo), 也不能反映儀器的線性范圍。為了全面了解紫外可見分光光度計的線性, 還需按下述方法進行測試。

　　測試紫外可見分光光度計線性的方法很多, zui常用的大致有以下6 種:

　　1. 溶液稀釋法

　　溶液稀釋法的具體作法是將鉻酸鉀( K2 CrO4 ) 稀釋到不同濃度, 測量不同波長處的吸光度值(一般需測量85 個吸光度值) , 然后, 根據(jù)此數(shù)據(jù)作曲線, 再根據(jù)曲線來判斷紫外可見分光光度計的線性。

　　2. 中性濾光片法

　　一般以3 塊中性濾光片疊加, 比較測定值與計算值之差來判斷紫外可見分光光度計的線性。

　　3. 百分法

　　百分法是將被測試樣的濃度成倍增加, 測其吸光度, 作曲線, 判斷實驗值偏離比耳定律直線部分的程度。

　　4. 改變樣品池厚度法

　　用不同厚度的樣品池來測量鉻酸鉀( K2 CrO4 ) 的吸光度, 以此來判斷紫外可見分光光度計的線性。

　　5. 旋轉(zhuǎn)扇形板法

　　以不同透射率的扇形板在樣品光束中旋轉(zhuǎn), 測出各點透射率與真值進行比較; 以此來判斷紫外可見分光光度計的線性。

　　6. 光疊加法

利用孔規(guī)來分段測試, 然后作曲線判斷紫外可見分光光度計的線性。